مقالات

هلیکوباکتر پیلوری با جذب کلسترول و استروئیدها به فرم موکوئیدی مقاوم به آنتی بیوتیک تبدیل می شود

1401/6/15 16:21
مقدمه

هلیکوباکتر پیلوری کلسترول را جذب و پس ازگلوکوزیله کردن، آنرا در غشای سلولی خود جای می دهد. هلیکوباکتر همچنین دارای ویژگی جذب استروئیدها ،که از کلسترول مشتق می شوند، می باشد. بعلاوه، آنزیمهای بیوسنتز و فعالسازی هورمونهای استروئیدی در معده انسان تولید میشوند. بدین ترتیب، هلیکو در زیستگاه اختصاصی خودش یعنی معده انسان به کلسترول و هورمونهای استروئیدی دسترسی کافی دارد. در این مطالعه،کلسترول یا هورمون استروئیدی به محیط کشت اضافه شدند و تغییرات رشد و مورفولوژی هلیکوباکتر و مقاومت آنتی بیوتیکی آن بررسی شد.

روش کار

از یک سویه هلیکوباکتر، سوسپانسیونی با کدورت 2 مک فارلند تهیه شد. میزان 50 میکرولیتر از این سوسپانسیون به لوله های حاوی بروسلا براث دارای 50،30، 100و 200 میکرومولار کلسترول یا استرادیول تلقیح شد. یک لوله حاوی بروسلا براث و 5% سرم به عنوان کنترل تلقیح شد. لوله ها در انکوباتور CO2 در C⸰37 گرمخانه گذاری شدند. پس از 72 ساعت، 25 میکرولیتر از هر لوله بر روی پلیت های بروسلا بلاد آگار حاوی و فاقد غلظت های مشابه کلسترول یا استرادیول تلقیح گردید. پس از انکوباسیون، پلیت ها برای رشد باکتری ها بررسی و رنگ آمیزی گرم انجام شد. از آنجا که هلیکوباکتر در پلیت کنترل کلنی های سرسوزنی و براق داشت ولی در معرض غلظت های 100 و 200 میکرومولارکلسترول و استرادیول بصورت توده چسبنده و غلیظ (موکویید) رشد کرد، برای تایید هویت آن وجود ژن 16S rRNA هلیکوباکتر پیلوری بررسی شد. سوسپانسیونی با کدورت 2 مک فارلند از سویه غیر موکوئید و موکوئید تهیه و حساسیت آنها به مترونیدازول (µg/ml 8)، کلاریترومایسین (2)، آموکسی سیلین (1)، و تتراسایکلین (0.5) به روش آگار دایلوشن بررسی شد. حساسیت باکتری ها نسبت به سیمواستاتین، بعنوان یک کاهش دهنده کلسترول، نیز با غلظت های µg/ml 40، 20، 10با روش مشابه بررسی شد.

نتایج

هلیکوباکترپیلوری که در محیط کشت کنترل کلنی های تیپیک تشکیل داد، درحضور غلظت های بالای کلسترول و استرادیول توده های موکوئید تشکیل داد. بررسی میکروسکوپی نشان داد که در مقایسه با هلیکو کنترل اسپیرال، باکتری های موکوئید به صورت باسیل های کوتاه دیده شدند. الکتروفورز محصولات PCR و تشکیل باند های 521bp ، وجود ژن 16SrRNA هلیکوباکترپیلوری را در هر دو سویه کنترل و موکوئید نشان داد. بدین ترتیب هویت باکتری موکوئید مشابه سویه کنترل تایید شد. سویه کنترل به تمام آنتی بیوتیکها بجز مترونیدازول و غلظت µg/ml 40 سیمواستاتین حساس بود ولی فرم موکوئید به تمام آنتی بیوتیکها و نیز سیمواستاتین مقاوم بود.

نتیجه‌گیری

هلیکو باکتر پیلوری در غلظت های بالای کلسترول و استروئید با جذب و گلیکوزیله کردن آنها دچار تغییراتی در ساختار سطحی خود از جمله LPS می شود که نتیجه آن تشکیل توده های موکوئیدی است. مشاهده باکتری های موکوئید بشکل باسیل های کوتاه می تواند نشان دهنده تکثیر سریع باکتری ها باشد که قبل از طویل و خمیده شدن، تقسیم می شوند. این تکثیر سریع می تواند تشکیل توده موکوئید با حجم بیشتر نسبت به سویه کنترل را توجیه کند. وجود این پوشش موکوئیدی احتمالا از نفوذ ترکیبات ضد میکروبی ممانعت می کند و در نتیجه ریشه کنی باکتری از معده موفق نخواهد بود.